Tercer día: Jueves 28 de mayo de 2009
Mostracion e introducción a HPLC Y FPLC. Funcionamiento de la columna de FPLC con cloruro de cobalto.
Explicación e introducción en la investigación del tema del proyecto.
-¿Qué síntomas tiene la persona con esta enfermedad?
-¿A que se deben?
-¿Qué son las porfirinas y el hemo?
-Diagrama de la síntesis de Hemo
Introducción a la purificación de proteínas.
1-Datos a tener en cuenta para la realización de una purificación
- Origen de la muestra de partida.
- Procariota Vs. Eucariota
- Animal Vs. Vegetal
- Tejido Vs. Cultivo Celular
- Célula Vs. Organela Subcelular
- Destino o finalidad de la proteína a purificar.
- Para la obtención de anticuerpos
- Para determinar su estructura Sintesis del Hemo
- Para determinar su actividad Biológica
- Naturaleza de la proteína a purificar.
- Act. Enzimática Vs. Estructural
- Presencia de determinados grupos funcionales o dominios
- Requerimiento de Co-Factores
2-Estrategia general de purificación
- Definir Objetivos
- Definir las propiedades de las proteínas
- Desarrollar ensayos analíticos
- Minimizar el manejo de la muestra en cada paso
- Minimizar el uso de aditivos
- Eliminar contaminantes perjudiciales cuanto antes
- Utilizar una técnica diferente en cada paso
- Minimizar el numero de pasos
SEGUIR UN PROTOCOLO LO MAS SIMPLE Y SENCILLO POSIBLE
3-Comprensión del método: Precipitación de proteínas por exceso de sal
SALTING OUT
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