InmunoGlobulinas y RIA

Jueves 26 de Junio del 2009

LasInmunoglobulinas son glucoproteínas del tipo gamma globulina. Pueden encontrarse de forma soluble en la sangre o en otros fluidos corporales de los vertebrados, disponiendo de una forma idéntica que actúa como receptor de los linfocitos B y son empleados por el sistema inmunitario para identificar y neutralizar elementos extraños tales como bacterias, virus o parásitos.

La inmunoglobulina típica esta constituida por unidades estructurales básicas, cada una de ellas con dos grandes cadenas pesadas y dos cadenas ligeras de menor tamaño, que forman, por ejemplo, monómeros con una unidad, dímeros con dos unidades o pentámeros con cinco unidades. Los anticuerpos son sintetizados por un tipo de leucocito denominado linfocito B. Existen distintas modalidades de anticuerpo, isotipos, basadas en la forma de cadena pesada que posean. Se conocen cinco clases diferentes de isotipos en mamíferos que desempeñan funciones diferentes, contribuyendo a dirigir la respuesta inmune adecuada para cada distinto tipo de cuerpo extraño que encuentran.^[2

Medicion de actividades enzimaticas y visita al bioterio

Jueves 18 de Junio de 2009

Aprendimos algunas metodologias usadas para determinar actividades enzimaticas a punto final y de manera continua, en todos los casos utilizamos concentracion de sustrato saturante.

Pudimos comprobar como varia la actividad enzimatica respecto a la concentración de enzima . Observamos dependencia directa de la actividad enzimatica con la concentracion de enzima, para ello utilizamos como enzima ejemplo la fosfatasa alcalina presente en el citosol de rata, usando como sustrato la paranitrofenilfosfato.

La fosfatasa alcalina (ALP) es una enzima hidrolasa responsable de eliminar grupos de fosfatos de varios tipos de moléculas como nucleótidos, proteínas y alcaloides. El proceso de eliminar el grupo fosfático se denomina desfosforilación. Como sugiere su nombre, las fosfatasas alcalinas son más efectivas en un entorno alcalino.

Luego de la practica visitamos el bioterio, en el cual se nos fue explicada los procedimientos para la crianza y la reproduccion de diferentes sepas de ratas y ratones, asi tambien se nos mostraron las el criadero de conejos que especialmente se usa para la obtencion de anticuerpos. Por ultimo nos explicaron los cuidados a tener con los animales nombrados tanto dentro y fuera del mismo.

Las investigadoras Laura y Marta nos relataron los cuidados que ellas tienen para el manejo y la utilizacion de animales que se utilizan como modelos de experimentación. Para tal fin se siguen reglas internacionales que se pueden encontrar en : "Guide for the Care and Use of Laboratory Animals, National Research Council, (National Academy Press, Washington, D.C. 1996)"

Determinacion de glucosa en sangre

Jueves 11 de Junio del 2009

El objetivo de la práctica fue deterinar la glucosa en suero de sangre de rata, el que había sido obtenido mediante la extracción de sangre del ojo de la rata, previamente anestesiada, con heparina (un anticoagulante) y un capilar eparinizado. Esa sangre fue centrifugada para separar el suero.





Fundamento del método: La glucosa es oxidada enzimaticamente por la glucosa oxidasa a acido gluconico y agua oxigenada, el agua oxigenada en presencia de peroxidasa produce la copulacion oxidativa del fenol con la 4-aminofenazona dando lugar a la formacion de un cromogeno rojo cereza con absorvancia màxima a 505 nm.





Preparamos el reactivo y medimos la absorbancia de una solución estandar, del suero de una rata control, del suero de una rata con baja y una con alta inducción de porfiria, y de un blanco. (Todo por duplicado)


Los resultados que obtuvimos fueron:

Bajo:
0,409

Control:
0,341
0,361

Alto:
0,451
0,423

Estandar:
1,194
1,294





Conclusión: A pesar de que las ratas como modelo experimental tienen baja disponibilidad de glucosa hepática, pueden ser normoglucémicas, como se ve en que las absorbancias (por consecuente la concentración de glucosa) no son muy diferentes entre la rata control, la que tiene baja inducción y la que tiene alta inducción de porfiria.

Los diferentes tipos de porfirias

Jueves 4 de Junio del 2009


Las porfirias son enfermedades causadas por un déficit en la actividad de las enzimas que participan en el camino metabólico para la formación del grupo hemo. Este déficit conlleva a la acumulación de metabolitos intermedios (las porfirinas) que son los responsables de las manifestaciones clínicas y analíticas (como la fosforescencia en la orina a la exposición con luz UV).
























La porfiria cutánea tarda es la porfiria más frecuente en Europa y América del Norte. este tipo de porfiria se da por una disminución de la actividad de la enzima uroporfirinógeno decarboxilasa (URO-D) por lo que se acumulan uroporfirinógeno 1 y coproporfirinógeno 1.
Es hereditaria recesiva (a diferencia de
la porfiria aguda).























Los sintomas son:

Enrojecimiento de la orina
Fluorescencia y coloreado de los dientes
Fotosensibilidad en la piel
Lesiones mutilantes en la piel
Hipertricosis
Esta porfiria es tratada con inyecciones de hemo.






















El hexaclorobenceno... ¿Qué es y en que nos afecta el HBC?

El HBC es un muy distribuido funguicida, usado para controlar parásitos en granos de semilla. Este es producido en grandes cantidades como un subproducto de la manufactura de solventes clorados. Diferentes estudios experimentales en animales demostraron la capacidad del HCB de para inducir porfiria cutánea tarda. Estecompuesto interfiere en los caminos metaólicos del hemo, de los carbophidratos y de los lípidos.
Se genera un bloqueo en enzimas de la gluconeogénesis, provocando un decrecimiento de la glucosa hepática.
El HBC provoca una disrupción en el metabolismo de los fosfolípido y afecta el metabolismo de los ácidos grasos, observado en ratas hembras tratadas por dos semanas con HCB. Estas ratas mostraron una disminución de ácidos grasos, y un aumento de ácido araquidónico libre. Los cambios observados se relacionan con diferentes aspectos de la indución de toxicidad hepática por HCB, tales como la alteración en la fluidez de la membrada y de las funciones de las proteínas periféricas.
También se notaron alteraciones en las concentraciones de CORT y progesterona en plasma, pero sin cambios en los niveles de aldosterona. Otras drogas cloradas (como la TCDD) producen un notable aumeto en el CORT en plasma, experimentado en ratones expuestos prenatalmente, y en ratas Sprague-Dawley en el caso de la TCDD.
se investigó el efecto del HCB en los niveles de GC en plasma, el número y la afinidad de GR hepático, y en la biosíntesis de GC en tejidos adrenales. Todo esto se relacionó con el bloqueo en la gluconeogénesis causado por el HCB en hígados de ratas para referirlo a la odulación de la porfiria.

Porfiria aguda... AIA y DDC ¿En qué nos influyen?

En la porfiria aguda hay una mala regulación de la enzima ALA sintetasa (la enzima que cataliza la formación de ALA) por un déficit de hemo (causado por una dismiución de la actividad de alguna otra enzma en su camino metabólico). El ALA es un metabolito que llevará al hemo, y su formación es un paso en el que se regula negativamente por feedback todo el camino. Es decir, si hay mucho hemo, la ALA-S actúa poco, si hay poco hemo, ésta actúa mas para cubrir la necesidad. lo pacientes porfíricos pueden vivir tranquilamente en estado natural, pero frente a una necesidad de detoxificación de alguna droga (en la que participa el grupo hemo) pueden sufrir una crisis por falta de éste.Se observó experimentalmente que la glucosa mejora a los pacientes porfíricos, y se hizo el modelo de que los carbohidratos provocan un "efecto glucosa" sobre la ALA-S previniendo su inducción.Se oservaron también los efectos de ciertas drogas como fenobarbital y 4-etildihidropiridina que inducen a una porfiria y una depresion de hemo, y causan también un bloqueo en la gluconeogénesis que es el mecanismo ma importante para que se pueda dar el "efecto glucosa". AIA y DDC son otros compuestos que producen depresión de la síntesis de hemo, y por consecuente, un aumento en la actividad de la ALA-S, llevando a una acumulación de ALA. El DDC y el AIA inhiben enzimas del camino metabólico del hemo, generando una acumulación de porfirinas (metabolitos intermedios). Esto lleva a un decrecimiento del pool de homo, es decir, hay menos cantidad resguardada del compuesto, aunque así y todo alcanza para la producción de hemoglobina.En conclusion, el AIA y DDC inducen a una porfiria experimental, similar a la porfiria aguda en humanos, y esto sirve para analizar la relación de las alteraciones generadas por drogas con el metabolismo de glucosa.El modelo experimental en ratas con porfiria inducida por AIA y DDC apunta a desarrollar mejor el modelo de porfiria.

¿Qué son los Xenobióticos?

Jueves 4 de Junio del 2009

La palabra xenobiótico deriva del griego "xeno" ("extraño") y "bio" ("vida"). Se aplica a los compuestos cuya estructura química en la naturaleza es poco frecuente o inexistente debido a que son compuestos sintetizados por el hombre en el laboratorio. La mayoría han aparecido en el medio ambiente durante los últimos 100 años.